做親和柱時，使用Sepharose 4B 和 Sepharose CL-4B有何不同？

Sepharose 4B指4%的瓊脂糖

Sepharose CL-4B指4%高度鉸鏈的瓊脂糖

他們的區(qū)別在于鉸鏈程度不一樣，在親和層析色譜中，介質(zhì)鉸鏈程度越高，化學(xué)穩(wěn)定性就應(yīng)該越高。這樣就可以耐受更加苛刻條件洗脫而偶聯(lián)的配基不會脫落。越是硬質(zhì)的介質(zhì)，耐受的流速也會越高。這樣更節(jié)省平衡洗脫的時間。

親和柱介紹

目前，專用于黃曲霉毒素分離純化的固相萃取產(chǎn)品有兩類:

二是多功能凈化柱(MFC)它是一種特殊的SPE柱，以極性、非極性及離子交換等兒類基團(tuán)組成填充劑，可選擇性吸附樣液中的脂類、蛋白類等雜質(zhì)，AFT不被吸附而直接通過，MFC的操作更為簡便，不需要進(jìn)行活化、淋洗和洗脫操作只需直接上樣，10秒鐘內(nèi)即可完成整個凈化過程，凈化效果理想。

親和柱——親和層析的原理

通常，在開始親和層析前需要預(yù)先進(jìn)行全細(xì)胞提取物的粗制，例如細(xì)胞裂解液，生長培養(yǎng)基。

首先將固定相裝入帶有流動相的色譜柱中，其中含有某類特定的生物大分子（從DNA到蛋白質(zhì)，取決于實(shí)驗(yàn)需求）。等待一段時間使兩相充分混合，隨后將洗滌緩沖液倒入色譜柱中。洗滌緩沖液通過破壞非目標(biāo)生物分子與固定相的較弱結(jié)合來去除非目標(biāo)生物分子。目標(biāo)生物分子對固定相具有較高的親和力，因此能夠保持與固定相的結(jié)合，而不會被洗滌緩沖液沖走。然后將洗脫緩沖液倒入含有剩余目標(biāo)生物分子的色譜柱中。洗脫緩沖液比洗滌緩沖液，能夠從更大程度上減弱靶生物分子與固定相之間的相互作用，從而洗脫靶生物分子。洗脫得到的溶液包含洗脫緩沖液和目標(biāo)分子，稱為洗脫液。

固定相一般是凝膠基質(zhì)，常見的有瓊脂糖。為了防止目標(biāo)分子與配體結(jié)合過程中的空間干擾或重疊，首先將含有烴鏈的抑制連接到瓊脂糖珠（固體支持物）上。這種具有烴鏈的抑制通常被稱為瓊脂糖珠和靶分子之間的間隔基。