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養(yǎng)豬場(chǎng)熒光定量PCR推薦

發(fā)布時(shí)間:2020-09-27 05:13  

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根據(jù)動(dòng)物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級(jí)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法向屠宰場(chǎng)派駐(出)官i方獸醫(yī)實(shí)施屠宰檢疫。根據(jù)應(yīng)對(duì)流行性腹瀉病毒的經(jīng)驗(yàn),在不影響動(dòng)物性能和飼料成本的情況下,替換原料的可行性使得很多生產(chǎn)者不再使用豬源原料。按照生豬屠宰檢疫規(guī)程和相關(guān)規(guī)定,屠宰檢疫內(nèi)容包括傳i染病和寄i生蟲(chóng)病,檢疫流程包括生豬進(jìn)入屠宰廠(場(chǎng)、點(diǎn))監(jiān)督查驗(yàn)、檢疫申報(bào)、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結(jié)果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫(yī)監(jiān)督屠宰企業(yè)開(kāi)展非洲自檢,對(duì)沒(méi)有開(kāi)展自檢的屠宰企業(yè),對(duì)屠宰后的生豬產(chǎn)品一律不得出具動(dòng)物檢疫證明。

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實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,后通過(guò)擴(kuò)增曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過(guò)溶解曲線(xiàn),確定PCR反應(yīng)是否特異。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測(cè)定、基因芯片結(jié)果驗(yàn)證、藥i效分析等。金開(kāi)瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針?lè)ㄟM(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè),從引物設(shè)計(jì)到檢測(cè)一次性完成,提供2種常用的內(nèi)參引物及免費(fèi)的專(zhuān)業(yè)數(shù)據(jù)分析,每個(gè)樣品設(shè)置至少三個(gè)平行對(duì)照,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。


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相對(duì)定量可以對(duì)每個(gè)樣本中模版的其實(shí)水平之間的差異進(jìn)行精i確比較,沒(méi)必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對(duì)水平不用使用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)就可以確定。夏秋季節(jié)消毒沒(méi)什么問(wèn)題,但到了冬天,他們?nèi)匀辉谏嵬庋粝?,這樣的效果是很差的。相對(duì)定量分析以實(shí)時(shí)PCR方式執(zhí)行,在實(shí)時(shí)PCR分析過(guò)程中,PCR基因擴(kuò)增一直在監(jiān)控中,在PCR進(jìn)行期間進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,而不是在PCR結(jié)束時(shí)(終點(diǎn)PCR)才獲取數(shù)據(jù)。在實(shí)時(shí)PCR中,反應(yīng)是在目標(biāo)的擴(kuò)增早被監(jiān)測(cè)到時(shí)用循環(huán)中的時(shí)間點(diǎn)來(lái)描述的,而不是在PCR結(jié)束時(shí)通過(guò)目標(biāo)的累計(jì)數(shù)來(lái)描述。

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在PCR反應(yīng)體系中,加入過(guò)量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號(hào),而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào),從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。從20世紀(jì)60和70年代i開(kāi)始ASF由非洲蔓延至歐美地區(qū),2007年格魯吉亞、亞美尼亞、阿塞拜疆和俄羅斯都出現(xiàn)了大面積流行,2018年8月也開(kāi)始在我國(guó)快速蔓延開(kāi)來(lái),對(duì)我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展構(gòu)成巨大威脅。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過(guò)溶解曲線(xiàn),確定PCR反應(yīng)是否特異。


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FQ-PCR在醫(yī)學(xué)栓測(cè)中有價(jià)值的應(yīng)用領(lǐng)城就是對(duì)感i染性疾病的診斷,只要有限的核酸序列清楚,運(yùn)用FQ-PCR技術(shù),檢測(cè)任何病原體。二、應(yīng)急期間,比對(duì)符合要求的檢測(cè)試劑盒(試紙條)可使用至2019年6月30日。目前,對(duì)一些培養(yǎng)周期長(zhǎng)或缺乏穩(wěn)定可靠的檢測(cè)手段的病原體,可以考慮用FQ-PCR檢測(cè),為臨床診斷提供依據(jù)FQ-PCR對(duì)病原體的檢測(cè)克服了免i疫學(xué)檢測(cè)的“窗口期“問(wèn)題,可判斷疾病是否隱性或亞臨床狀態(tài)。FQ-PCR技術(shù)可以應(yīng)用于腫癟的研究及診斷。

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實(shí)時(shí)熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過(guò)程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進(jìn)行模板的擴(kuò)增。但在實(shí)際的PCR反應(yīng)過(guò)程中,隨著反應(yīng)的進(jìn)行由于體系中各成分的消耗(主要是由于聚合酶活力的衰減)使得靶序列并非按指數(shù)方式擴(kuò)增,而是按線(xiàn)性的方式增長(zhǎng)進(jìn)入平臺(tái)期。③安全無(wú)毒,不使用傳統(tǒng)方法中的氯i仿等有毒試劑,對(duì)實(shí)驗(yàn)操作人員的傷害減少到最少,完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念。因此在起始模板量與終點(diǎn)的熒光信號(hào)強(qiáng)度間沒(méi)有可靠的相關(guān)性。如采用常規(guī)的終點(diǎn)檢測(cè)法(利用EB染色來(lái)判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的多少,從而間接的判斷起始拷貝量),即使起始模板量相同經(jīng)PCR擴(kuò)增、EB染色后也完全有可能得到不同的終點(diǎn)熒光信號(hào)強(qiáng)度。