蛋白質(zhì)結(jié)晶方法

液-液擴(kuò)散(Liquid–Liquid Diffusion) 這種方法中，蛋白質(zhì)溶液和含有沉淀劑的溶液是彼此分層在一個(gè)有小孔的毛細(xì)管中，一個(gè)測(cè)熔點(diǎn)用的毛細(xì)管一般即可（如圖1.2）。下層是密度大的溶液，例如銨或PEG溶液。如果如MPD被用作沉淀劑，它會(huì)在上層。以1：1混合，沉淀劑的濃度應(yīng)該是所期終濃度的二倍。兩種溶液（各自約5μl）通過針頭導(dǎo)入毛細(xì)管，先導(dǎo)入下層的。通過一個(gè)簡(jiǎn)易的搖擺式離心機(jī)去除氣泡。再加入上層，進(jìn)而兩層之間形成一個(gè)明顯的界面，它們會(huì)逐漸彼此擴(kuò)散。 Garc′?a-Ruiz and Moreno（1994）已經(jīng)發(fā)展液-液擴(kuò)散技術(shù)至法。蛋白質(zhì)溶液通過毛細(xì)力被吸入狹窄的管中，管的一端是封閉的。接著，開放端入置于小容器的凝膠中，凝膠使得管豎直，蛋白質(zhì)溶液與凝膠接觸。含有沉淀劑的溶液被倒在凝膠上，整個(gè)裝置被保存于封閉的盒子以防蒸發(fā)。沉淀劑通過凝膠和毛細(xì)管的擴(kuò)散時(shí)間可以由毛細(xì)管插入凝膠的深度控制，從而蛋白質(zhì)溶液中即可形成過飽和區(qū)域，毛細(xì)管底部高而頂部低。這也可作為一個(gè)篩選佳結(jié)晶條件的額外信息。

蛋白結(jié)晶板使用

用于人工和高通量蛋白晶體生長以及其他生物或有機(jī)晶體生長的設(shè)備和方法.一微孔板包含多個(gè)單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個(gè)單元格中至少存在一個(gè)上部開口的孔.單元格中的每個(gè)孔底部可以封閉,或者其底部是開口的,但孔底部由一獨(dú)立部件封閉,其可以為獨(dú)立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。

獲得晶體及提高晶體質(zhì)量是蛋白質(zhì)結(jié)晶方法學(xué)中的兩大基本問題.為解決這兩個(gè)問題,結(jié)構(gòu)生物學(xué)家已發(fā)展了許多方法,其中針對(duì)蛋白質(zhì)本身進(jìn)行分子改造是非常重要的方法之一.通過蛋白質(zhì)工程技術(shù),如突變,還原化修飾,剪切或刪除構(gòu)象柔性環(huán)區(qū),融合蛋白,復(fù)合物共結(jié)晶,原位蛋白質(zhì)水解等方法對(duì)蛋白質(zhì)本身進(jìn)行分子改造。

蛋白結(jié)晶板發(fā)展

可明顯提高其結(jié)晶成功率及晶體質(zhì)量.隨著該方面成功案例的不斷積累,分子改造技術(shù)越來越凸顯出其在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析中的重要作用,特別是對(duì)一些難以結(jié)晶或提高晶體質(zhì)量的蛋白質(zhì)而言,其應(yīng)用價(jià)值更不可忽視.針對(duì)近年來分子改造技術(shù)在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的應(yīng)用進(jìn)行了回顧與總結(jié),并展望了其未來的發(fā)展。

在高密度微孔板技術(shù)和DNA微陣列技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的蛋白質(zhì)芯片技術(shù),能夠在蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行基因高通量表達(dá)分析,從而成為蛋白質(zhì)組學(xué)研究的有效方法.蛋白質(zhì)芯片依靠手工,壓印或噴墨的方法將探針蛋白點(diǎn)樣在化學(xué)膜,凝膠,微孔板或玻片上形成陣列,經(jīng)過與樣品的雜交捕獲靶蛋白。

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