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發(fā)布時(shí)間:2021-10-01 21:21  

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RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性,反應(yīng)溫度在37°C左右。




重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物,能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動(dòng) DNA合成,對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的 DNA鏈與SSB結(jié)合,防止進(jìn)一步替換。在這個(gè)體系中,由兩個(gè)相對的引物起始一個(gè)合成事件。



數(shù)字PCR作為新定量技術(shù),主要采用當(dāng)前分析化學(xué)熱門研究領(lǐng)域的微流控或微滴化方法,借助專門設(shè)備將50微升左右核酸溶液樣本大量稀釋后,分割成了近10萬個(gè)液滴分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中,單一液滴為獨(dú)立反應(yīng)單元,每個(gè)反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個(gè)。